細(xì)胞培養(yǎng)（Ce11culture）是模擬機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件，將細(xì)胞從機(jī)體中取出，在人工條件下使其生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代，進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。近年來(lái)，廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞工程等領(lǐng)域，發(fā)展成一種重要生物技術(shù)，并取得顯著成就。由體內(nèi)直接取出組織或細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)叫原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)細(xì)胞離體時(shí)間短，性狀與體內(nèi)相似，適用于研究。一般說(shuō)來(lái)，幼稚狀態(tài)的組織和細(xì)胞，如：動(dòng)物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進(jìn)行原代培養(yǎng)。

　　小鼠原代細(xì)胞的分離及細(xì)胞計(jì)數(shù)操作：

　　1、取材

　　用頸椎脫位法使小鼠迅速死亡。然后，把整個(gè)動(dòng)物浸入盛有75，乙醇的燒杯中數(shù)秒鐘消毒，取出后放在大平皿中攜入超凈臺(tái)。用消過(guò)毒的剪刀剪開(kāi)用乙醇再次消毒后的皮膚，剖腹取出內(nèi)臟器官或組織。置于無(wú)菌平皿中。

　　2、切割

　　用滅菌的PBS液將取出的臟器或組織清洗三次，然后用眼科手術(shù)剪刀仔細(xì)將組織反復(fù)剪碎，直到成1m左右的小塊，再用PBS清洗，洗到組織塊發(fā)白為止。移入無(wú)菌離心管中，靜置數(shù)分鐘，使組織塊自然沉淀到管底，棄去上清。

　　3、消化

　　吸取0.25，胰蛋白酶--0.02，EDTA混合消化液1ml，加入離心管中，與組織塊混勻后，加上管口塞子，37℃水浴中消化30分鐘，每隔5分鐘搖動(dòng)一下試管，使組織與消化液充分接觸，靜止，吸去上清。

　　4、制備單細(xì)胞懸液

　　向含有經(jīng)消化的器官或組織的離心管中加入2-3ml含10%小牛血清的DWEM培養(yǎng)基，用吸管吸打數(shù)次，直到看不到塊狀組織。

　　5、細(xì)胞計(jì)數(shù)

　　1.蓋好蓋玻片：取一套血球計(jì)數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計(jì)數(shù)槽上。2.將細(xì)胞懸液滴入計(jì)數(shù)板：將待測(cè)細(xì)胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑小?.統(tǒng)計(jì)四個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)：將血球計(jì)數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動(dòng)計(jì)數(shù)板，當(dāng)看到鏡中出現(xiàn)計(jì)數(shù)方格后，數(shù)出四角的四個(gè)大格（每個(gè)大格含有16個(gè)中格）中的細(xì)胞數(shù)目。4.計(jì)算原細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)即可。